大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)分析
簡(jiǎn)要描述：
大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)分析EPI300菌株有一個(gè)突變的trfA基因，該基因表達(dá)出的蛋白產(chǎn)物可以促進(jìn)含有ori V復(fù)制子的質(zhì)粒的高拷貝擴(kuò)繁，誘導(dǎo)液（CopyCutter Induction Solution）可以誘導(dǎo)trfA基因的表達(dá)。
產(chǎn)品時(shí)間：2024-07-16
打印當(dāng)前頁EPI300 Chemically Competent Cell
大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
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貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
MF2297-1000UL | EPI300 Chemically Competent Cell大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl | 429 |
MF2297-5000UL | EPI300 Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 50×100μl | 1799 |
產(chǎn)品組分：
組分編號(hào) | 組分名 | 貨號(hào)（規(guī)格） | |
MF2297-1000UL | MF2297-5000UL | ||
MF2297-A | EPI300Chemically Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2297-B | Control Vector puC19,10pg/μl | 10μl | 10μl |
菌株描述
EPI300菌株有一個(gè)突變的trfA基因，該基因表達(dá)出的蛋白產(chǎn)物可以促進(jìn)含有ori V復(fù)制子的質(zhì)粒的高拷貝擴(kuò)繁，誘導(dǎo)液（CopyCutter Induction Solution）可以誘導(dǎo)trfA基因的表達(dá)。當(dāng)含有ori V復(fù)制子質(zhì)粒的EPI300細(xì)胞在LB/2YT或SOB培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)，trfA基因的表達(dá)被抑制，ori V復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)維持在很低的水平；當(dāng)在培養(yǎng)基中加入誘導(dǎo)液（CopyCutter Induction Solution），ori V復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)可維持在很高的水平，提高了質(zhì)粒產(chǎn)量。因此EPI300菌株可以降低ori V復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)，特別適合于各種不穩(wěn)定 DNA 或毒性基因的克隆。
【更多特征】：
[mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型，使EPI300適合于甲基化DNA的有效克隆；
endA1的突變確保質(zhì)粒克隆的高產(chǎn)量；recA1的突變確保大分子DNA插入的穩(wěn)定性；
lacZΔM15標(biāo)記的存在，使EPI300適用于藍(lán)白斑篩選；
rpsL賦予EPI300鏈mei素抗性。
EPI300菌株基因型：F – mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara,leu)7697 galU galK λ – rpsL nupG trfA dhfr
產(chǎn)品描述
本品是大腸桿菌EPI300菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率＞3×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。
保存與運(yùn)輸條件：
保存：-80℃保存，六個(gè)月有效。
運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸。
注意事項(xiàng)
1） 感受態(tài)細(xì)胞必須用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在-80℃保存，不可反復(fù)凍融且放置時(shí)間過長(zhǎng)，否則會(huì)減低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2） 在冰上融化感受態(tài)細(xì)胞。
3） 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，需在相應(yīng)溫度及無菌條件下進(jìn)行。
4） 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
5） 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可保留部分連接反應(yīng)液以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到zui低。
6） 產(chǎn)品包裝內(nèi)含載體pUC19 DNA(10pg/μl)，供對(duì)照實(shí)驗(yàn)用。
7） 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)下進(jìn)行】
1） 從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細(xì)胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物），用手輕彈管底輕輕混勻（避免用槍吸打），冰浴靜置25min。
2） 42℃水浴熱激45s，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2min。此過程不要搖動(dòng)離心管。
3） 向每個(gè)離心管中加700 μl無菌的2YT或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養(yǎng)60min，目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
4） 低速離心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YT或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)過夜。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選，37℃培養(yǎng)至少15h。
【注意】：
a）涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的克隆較少，可通過離心（5,000 rpm，1min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。
b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。
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名稱 | 規(guī)格 | |
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MF2014-5ML | CopyCutter Induction Solution誘導(dǎo)液 | 5ml |
附表1固體和液體LB培養(yǎng)基配方
組分Component | LB（液體）/升 | LB（固體）/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 10g | 10g |
酵母提取物Yeast extract | 5g | 5g |
氯化鈉NaCl | 10g | 10g |
1N NaOH | 調(diào)整pH至7.0 | 調(diào)整pH至7.0 |
瓊脂Agar | / | 15g |
附表2固體和液體2-YT培養(yǎng)基配方
組分Component | 2YT（液體）/升 | 2YT（固體）/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 16g | 16g |
酵母提取物Yeast extract | 10g | 10g |
NaCl | 5g | 5g |
1N NaOH | 調(diào)整pH至7.0 | 調(diào)整pH至7.0 |
瓊脂Agar | / | 15g |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作，主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠(chéng)為信、合同守信"的經(jīng)營(yíng)理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)分析大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)分析