大腸桿菌化學感受態細胞表達分析

EPI300 Chemically Competent Cell

大腸桿菌化學感受態細胞

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產品組分：

菌株描述

EPI300菌株有一個突變的trfA基因，該基因表達出的蛋白產物可以促進含有ori V復制子的質粒的高拷貝擴繁，誘導液（CopyCutter Induction Solution）可以誘導trfA基因的表達。當含有ori V復制子質粒的EPI300細胞在LB/2YT或SOB培養基中生長時，trfA基因的表達被抑制，ori V復制子質粒的拷貝數維持在很低的水平；當在培養基中加入誘導液（CopyCutter Induction Solution），ori V復制子質粒的拷貝數可維持在很高的水平，提高了質粒產量。因此EPI300菌株可以降低ori V復制子質粒的拷貝數，特別適合于各種不穩定 DNA 或毒性基因的克隆。

【更多特征】：

[mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型，使EPI300適合于甲基化DNA的有效克隆；

endA1的突變確保質粒克隆的高產量；recA1的突變確保大分子DNA插入的穩定性；

lacZΔM15標記的存在，使EPI300適用于藍白斑篩選；

rpsL賦予EPI300鏈mei素抗性。

EPI300菌株基因型：F – mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara,leu)7697 galU galK λ – rpsL nupG trfA dhfr

產品描述

本品是大腸桿菌EPI300菌株經特殊工藝制作所得的感受態細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經pUC19質粒檢測轉化效率＞3×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個月轉化效率不發生改變。

保存與運輸條件：

保存：-80℃保存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1） 感受態細胞必須用干冰運輸。感受態細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態細胞的轉化效率。

2） 在冰上融化感受態細胞。

3） 進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。

4） 轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。

5） 為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到zui低。

6） 產品包裝內含載體pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用。

7） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1） 從-80℃冰箱取出取感受態細胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物），用手輕彈管底輕輕混勻（避免用槍吸打），冰浴靜置25min。

2） 42℃水浴熱激45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2min。此過程不要搖動離心管。

3） 向每個離心管中加700 μl無菌的2YT或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養60min，目的使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

4） 低速離心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含所選質粒篩選抗生素的2YT或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養過夜。如果進行藍白斑篩選，37℃培養至少15h。

【注意】：

a）涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉化產物涂布平板。若預計的克隆較少，可通過離心（5,000 rpm，1min）后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。

b）新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。 

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附表2固體和液體2-YT培養基配方

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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