羅丹明標(biāo)記麥胚凝集素 蛋白純化

Rhodamine-WGA (Rhodamine labeled Wheat Germ Agglutinin)

羅丹明標(biāo)記麥胚凝集素

產(chǎn)品標(biāo)簽

Rhodamine-WGA 小麥胚芽凝集素；FITC-WGA 麥胚凝集素；Plasma membrane 質(zhì)模標(biāo)記；Golgi apparatus 高爾基體染色；Yeast bud scars 酵母出芽痕；

產(chǎn)品信息

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產(chǎn)品描述

麥胚凝集素（Wheat Germ Agglutinin，WGA）是廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)的凝集素之一。WGA識別的糖類受體是N-乙酰葡糖胺（GlcNAc），傾向與N-乙酰葡糖胺的二聚體和三聚體結(jié)合。WGA能結(jié)合含N-乙酰葡糖胺末端或殼二糖的寡糖，這類結(jié)構(gòu)在許多血清和膜來源糖蛋白中普遍存在。細(xì)菌細(xì)胞壁肽聚糖、甲殼素（幾丁質(zhì)）、軟骨糖胺聚糖和糖脂也能結(jié)合WGA。天然WGA還能通過N-乙酰神經(jīng)氨酸（唾液酸）殘基與一些糖蛋白相互作用。WGA適用于胰島素受體的純化、血清蛋白和神經(jīng)示蹤。

麥胚凝集素（Wheat Germ Agglutinin，WGA）通常用來標(biāo)記糖蛋白，用于活細(xì)胞或固定細(xì)胞的質(zhì)膜成像，用于組織切片染色或其它標(biāo)準(zhǔn)的免疫分析實驗。WGA能用作一種革蘭氏染色劑，熒光標(biāo)記革蘭氏陽性菌（非革蘭氏陰性菌）。還能用于結(jié)合出芽酵母（比如釀酒酵母）的出芽痕。

本品是羅丹明標(biāo)記的麥胚凝集素（Rhodamine labeled Wheat Germ Agglutinin, Rhodamine-WGA），Ex/Em= 550/575nm，親和純化所得，基本不含未標(biāo)記的熒光素。建議工作濃度范圍是5-20μg/ml。

產(chǎn)品特性

1） 英文同義名：Wheat Germ Agglutinin, Rhodamine Conjugate; Rhodamine labeled Wheat Germ Agglutinin; Wheat germ agglutinin lectin, Rhodamine Conjugate; Rhodamine labeled WGA Lectin;

2） 中文同義名：麥胚凝集素，羅丹明標(biāo)記；羅丹明標(biāo)記的麥胚凝集素；羅丹明標(biāo)記的小麥胚芽凝集素；

3） 糖類特異性：N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）

4） 外觀：溶液（溶于10 mM HEPES, 0.15 M NaCl, pH 7.5, containing 0.1 mM Ca²⁺, 0.08% sodium azide, 25mM N-acetylglucosamine）

5） 蛋白濃度：5mg/ml

6） Ex/Em：550/575nm

7） 抑制和/或洗脫糖類：400mM N-乙酰葡糖胺

8） 應(yīng)用：IF、糖生物學(xué)

保存與運(yùn)輸方法

保存：2-8℃避光保存，至少1年有效。

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

注意事項

1） 本品置于2-8℃長期保存可能會產(chǎn)生沉淀，使用前請37℃溫育數(shù)分鐘，之后離心吸取上清使用。此操作基本不會對產(chǎn)生性能造成負(fù)影響。

2） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

質(zhì)膜標(biāo)記操作流程

一、標(biāo)記活的真核細(xì)胞

以下是對貼壁培養(yǎng)在蓋玻片上的活細(xì)胞的通用染色步驟。以下步驟使用HBSS溶液對哺乳動物細(xì)胞進(jìn)行優(yōu)化染色。根據(jù)不同的模型系統(tǒng)和預(yù)期效果來優(yōu)化染色時間和濃度。

1.1 制備染色工作液：用HBSS（無酚紅）稀釋羅丹明-WGA（5mg/ml）到工作濃度，常用工作濃度范圍為5-20μg/ml。使用細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋WGA偶聯(lián)物用于標(biāo)記可能導(dǎo)致增高的非細(xì)胞染色背景。

1.2 細(xì)胞標(biāo)記：加入足量的染色工作液完quan覆蓋蓋玻片上的細(xì)胞。37℃孵育10min。

1.3 細(xì)胞清洗：標(biāo)記結(jié)束后，吸走染色工作液，用合適的緩沖液清洗細(xì)胞2次。除非細(xì)胞要做固定，此時即可在預(yù)熱的HBSS或其它適合于成像的緩沖液中封片。

1.4 【可選】細(xì)胞固定：可能用4%多聚甲醛固定染色好的細(xì)胞，37℃ 15min，之后用緩沖液清洗，以及做另一種復(fù)染。如有必要用0.2% Triton X-100透化細(xì)胞。

二、標(biāo)記固定的真核細(xì)胞

以下是對貼壁培養(yǎng)、甲醛固定且未做透化處理細(xì)胞的通用染色步驟。根據(jù)不同的模型系統(tǒng)和預(yù)期效果來優(yōu)化染色時間和濃度。

2.1細(xì)胞固定

2.2 細(xì)胞清洗：

2.3 準(zhǔn)備染色工作液

2.4 細(xì)胞標(biāo)記

2.5 細(xì)胞清洗

2.6 細(xì)胞成像

應(yīng)用示例

1）文獻(xiàn)來源：Héctor M et al. Recognition and Blocking of Innate Immunity Cells by Candida albicans Chitin. Infection and Immunity Apr 2011, 79 (5) 1961-1970; DOI: 10.1128/IAI.01282-10

實驗對象：Candida albicans 白色念珠菌

實驗方法：Cells were harvested by low-speed centrifugation, washed twice with sterile PBS, stained with either 25 μg/ml calcofluor white (CFW) or 100 μg/ml fluorescein isothiocyanate-conjugated wheat germ agglutinin (WGA-FITC) and examined by phase differential interference contrast (DIC) and fluorescence microscopy using a Zeiss Axioplan 2 microscope.

實驗結(jié)果：

Fig 1. Staining of chitin in C. albicans wild-type (CAF2-1) and chs3Δ null mutant cells by using calcofluor white (A) and the fluorescent lectin WGA-FITC (B). The former stain detects chitin in all cells, while WGA is able to bind to accessible chitin only at the cell surface.

2）文獻(xiàn)來源：K. Stamer et al. Tau blocks traffic of organelles, neurofilaments, and APP vesicles in neurons and enhances oxidative stress. J Cell Biol. 2002 Mar 18; 156(6): 1051–1063. doi: 10.1083/jcb.200108057

實驗對象：Chick retinal ganglion neurons 雞視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元

實驗方法：For observing vesicles labeled with fluorescent lectins, cells at day 4 in culture were incubated with rhodamine-WGA at a final concentration of 4 μg/ml for 15 min. Vesicles were tracked with an Axioplan fluorescence microscope (ZEISS). To visualize CFP fluorescence of CFP-htau40, the FITC filter set was employed; WGA-rhodamine–labeled vesicles were observed by using the TRITC filter set.

Fig 2. Transport of Golgi-derived vesicles in chick retinal ganglion neurons. The growth cone is on the right (outside the picture frame). (A) After 2 d in culture, RGCs were stained with WGA, and movements of vesicles were monitored by confocal microscopy. The arrowheads point to an example of a retrogradely moving particle at 1.2 μm/s. (B) After 2 d in culture, RGCs were transfected with CFP-tau, and 2 d later they were stained with WGA. The tau-expressing axon (top, blue) contains almost no WGA-stained vesicles; one of the rare retrograde movements is indicated by arrows (0.7 μm/s; middle and bottom). By contrast, the axon not overexpressing tau (double arrows) contain numerous mobile particles.

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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