螢火蟲螢光素酶報告基因檢測 探針與染色

Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit

螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒

產品標簽

Firefly Luciferase 螢火蟲熒光素酶；Photinus pyralis；報告基因檢測；D-luciferin sodium D-熒光su鈉鹽；ATP生物發光檢測；CAS：61970-00-1；

產品信息

產品描述

螢火蟲螢光素酶（Firefly Luciferase）普遍用作一種報告基因來研究基因調控和功能，以及用于藥物篩選。由于哺乳動物細胞或組織缺乏任何內源性的熒光素酶活性和生物發光的天然屬性，螢火蟲熒光素酶是一種非常靈敏的遺傳報告子。螢火蟲螢光素酶是一種分子量~61kD的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，可以催化螢光素（Luciferin）氧化成氧化熒光素（Oxyluciferin），在此氧化過程中釋放出生物螢光（Bioluminescence）。這一熒光可通過化學發光儀（Luminometer）或液閃測定儀進行測定。

本螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒（Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit），正是利用螢光素為底物來檢測細胞內螢火蟲螢光素酶活性的試劑盒，操作簡單、快速、靈敏且呈良好的線性關系。

產品組分

保存與運輸方法

保存：細胞裂解液置于4℃保存三個月有效，-20℃保存一年有效；螢火蟲熒光素酶檢測試劑置于-20℃六個月有效，-80℃避光保存一年有效；

運輸：冰袋運輸。

注意事項

• 為了保證螢火蟲熒光素酶檢測試劑的穩定性，建議初次使用進行適當分裝，避光凍存，盡量降低反復凍融次數。內部測試顯示反復凍融三次對測定結果無明顯影響。

• 由于溫度對酶活性有影響，測定時樣品和試劑均需達到室溫后再進行測定。

• 為取得加測定結果，用單管的化學發光儀測定時，樣品和試劑混合后到測定前的時間需盡量控制在相同時間，比如30s內；使用具化學發光測定功能的多功能熒光酶標儀時，hao xian把樣品全部加好，然后統一加入螢火蟲熒光素酶檢測試劑。

• 樣品和試劑混合后，必須等待1~2s，再進行測定。測定時間通常為10s，根據情況可適當延長或縮短，但同一批樣品宜使用相同的測定時間。

• 為避免由于質粒轉染細胞效率差異引起的誤差，可同時轉入海腎熒光素酶報告基因質粒作為內參，用我司的雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒（貨號：MF4010-100T）進行檢測。

• 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、 細胞裂解

1.1 將含轉染有報告基因質粒的細胞內的培養基去除，對于貼壁細胞直接加PBS輕輕洗滌，對于懸浮細胞，低速離心收集細胞后用PBS輕輕洗滌。

1.2 將細胞裂解液充分混勻后，按下表用量來加入適量細胞裂解液，之后將培養板放在微型振蕩器上室溫震蕩15min，以充分裂解細胞。

1.3 將充分裂解后的產物于10,000~15,000rpm室溫離心3~5min，取上清用于測定。

二、 熒光素酶檢測

2.1 融解螢光素酶檢測試劑，并達到室溫。

2.2 按儀器說明書開啟化學發光儀或具有檢測化學發光功能的多功能酶標儀，設定參數，測定間隔設為2s，測定時間設為10s。

2.3 將細胞裂解產物按照20~100μl的體積加入測量管中（如果裂解產物足夠，請加入100μl；如果裂解產物不足可以適當減少用量，但同批裂解產物的使用量宜保持*）。

2.4 加入100μl螢光素酶檢測試劑，用槍打勻或用其它適當方式混勻后測定RLU（Relative light unit）。以細胞裂解液為空白對照。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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