EHA105 Competent Cell 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
簡(jiǎn)要描述：
EHA105 Competent Cell 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞：懋康生物提供的EHA105化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，基因型為C58 （rifR） Ti pEHA105 （pTiBo542DT- DNA） Succinamopine，經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品時(shí)間：2025-12-04
打印當(dāng)前頁EHA105 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品標(biāo)簽：
EHA101菌株；農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞；Rifampicin（Rif）利fu平；Kanamycin（kan）卡那mei素；EHA105；LBA4404；GV3101；AGL1；植物轉(zhuǎn)基因研究；
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貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
MF2302-1000UL | EHA105 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl | 320 |
MF2302-5000UL | EHA105 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 50×100μl | 1320 |
MF2302-10000UL | EHA105 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 100×100μl | 2150 |
產(chǎn)品描述：
EHA105菌株由EHA101菌株改造而來，染色體背景為C58，核基因含利fu平抗性基因rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的琥珀堿型Ti質(zhì)粒pEHA105（pTiBo542DT-DNA），此質(zhì)粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pEHA105（pTiBo542DT-DNA）質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能雖被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移）。EHA105菌株適用于水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作。
我司提供的EHA105化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，基因型為C58 (rifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT- DNA) Succinamopine，經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>104cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組分：
組分編號(hào) | 組分名稱 | 貨號(hào)（規(guī)格） | ||
MF2302-1000UL | MF2302-2000UL | MF2302-5000UL | ||
MF2302-A | EHA105 Chemically Competent Cell | 10×100μl | 20×100μl | 50×100μl |
MF2302-B | pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl) | 10μl | 10μl | 10μl |
保存與運(yùn)輸條件：
保存：-80℃保存，6個(gè)月有效。
運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸。
注意事項(xiàng)
1、感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-80℃，不可反復(fù)凍融和放置時(shí)間過長(zhǎng)，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2、整個(gè)轉(zhuǎn)化操作，嚴(yán)格根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件要求進(jìn)行。
3、加入質(zhì)粒的體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10。質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染，會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率急劇下降。質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。
4、為確保zui高轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過程應(yīng)盡量輕柔，并保持低溫。
5、轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終涂板用量。
6、平板上克隆密度過大時(shí)，由于營(yíng)養(yǎng)不足，克隆生長(zhǎng)變慢，菌落變小。為獲得大菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量。
7、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用方法
1、取-80℃保存的感受態(tài)細(xì)胞于室溫或手心片刻待其部分融化，達(dá)到冰水混合狀態(tài)時(shí)插入冰浴中使其完quan融化。
2、往100μl感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入1μg（體積不大于10μl）目的DNA，用手bo打管底使其混勻，依次于冰上靜置5min，液氮5min，37℃水浴5min，冰浴5min。
3、加入700μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基，于28℃振蕩培養(yǎng)2-3h。
4、6,000rpm離心1min，吸掉600ul上清，之后用槍輕輕吹打重懸菌體。之后加到含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上，用無菌玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，28℃培養(yǎng)2-3天。
【注意】：當(dāng)平板只含50μg/ml卡那mei素時(shí)，28℃培養(yǎng)48h即可；當(dāng)平板中同時(shí)加入50μg/ml卡那mei素和20μg/ml利fu平時(shí)，需28℃培養(yǎng)60h；若使用的平板含50μg/ml利fu平，需在28℃培養(yǎng)72-90h。
附表1 固體和液體LB培養(yǎng)基配方
組分Component | LB（液體）/升 | LB（固體）/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 10g | 10g |
酵母提取物Yeast extract | 5g | 5g |
氯化鈉NaCl | 10g | 10g |
1N NaOH | 調(diào)整pH至7.0 | 調(diào)整pH至7.0 |
瓊脂Agar | / | 15g |
附表2 固體和液體YEB培養(yǎng)基配方
組分Component | YEB（液體）/升 | YEB（固體）/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 5g | 5g |
酵母提取物Yeast extract | 1g | 1g |
牛肉浸膏Beef Extract | 5g | 5g |
蔗糖Sucrose | 5g | 5g |
七水硫suan鎂MgSO4·7H2O | 0.49g | 0.49g |
1N NaOH | 調(diào)整pH至7.0 | 調(diào)整pH至7.0 |
瓊脂Agar | / | 15g |
附表3 常見農(nóng)桿菌對(duì)抗生素敏感性總表
農(nóng)桿菌菌株 | 羧芐（carb） | 鏈mei素（strep） | 利fu平（rif） | 慶大mei素（gent） | 卡那mei素（kan） |
EHA101 | S | S | R | S | R |
EHA105 | S | S | R | S | S |
LBA4404 | S | R | R | S | S |
GV3101 | S | S | R | R | S |
AGL1 | R | S | R | S | S |
【備注】：S代表敏感，R代表抗性。 | |||||
— — Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
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