X-Gluc 克隆與表達分析

X-Gluc 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡糖苷酸環己胺鹽（X-beta-D- glucuronide CHA salt）

——轉基因植物zui常用報告基因GUS顯色底物，GUS染色定性研究

搜索關鍵詞：β-葡萄糖苷酶（β-glucuronidase，GUS）, 藍色顯色底物, 轉基因植物GUS表達, GUS染色（定性）, 報告基因gusA（uidA）, 活性檢測,  CAS：114162-64-0

作用機制：

X-Gluc，也稱為5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-D-glucuronide（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡糖苷酸），是β-葡萄糖苷酶（β-glucuronidase，GUS）的顯色底物，由一種廣泛使用的報告基因gusA（uidA）所編碼。GUS水解X-Gluc，生成一種無色的葡萄糖醛酸和一種肉眼可見的氯-溴靛藍（chloro-bromoindigo）深藍色沉淀。利用這一特性，X-Gluc常用來檢測植物細胞和組織中的GUS表達；另外，X-Gluc還能用來檢測大腸桿菌引起的感染狀況；或檢測食物或水源是否受細菌污染。

主要應用：轉基因植物報告基因GUS活性檢測，X-gluc用作顯色底物。

普遍應用優勢在于：絕大多數植物細胞內不存在內源性的GUS活性，而且GUS基因表達產物具有檢測方法簡單、靈敏度高，易于定量及定性分析，能夠與其他蛋白質基因融合等優勢，因此，GUS基因為植物工程研究中應用zui廣泛的報告基因（報道基因）之一。

1. GUS活性檢測（組織化學定位法，定性研究）

GUS催化底物X-gluc在酶活性位點生成深藍色沉淀，為研究外源基因在植物中表達具體部位研究提供很好的研究手段。且GUS酶和顯色產物非常穩定，植物中可以積累。

1. GUS染色液制備【作為參考，可按照具體實驗條件來調整】

2. GUS定性染色步驟

1. GUS活性檢測（熒光分析法，定量研究）

GUS催化熒光底物MUG 4-甲基傘型酮-beta-D-葡糖苷酸，將其水解為4-MU（4-甲基傘型酮）和β-D-葡萄糖醛酸。4-MU中的羥基解離后在365nm的光激發下產生455nm的熒光。此時用熒光分光光度計測定得到的是相對值，因此同時需要用標準物4-MU進行校準。

熒光定量分析GUS活性有兩種基本方法：1）在一個時間點測定GUS酶作用產物的總熒光量，需要設定空白對照，以消除內源熒光強度；2）測定一段時間內GUS的動力學過程。在酶反應初始階段，酶作用產物與時間呈線性關系，而內源性熒光物質的熒光量與時間無線性關系。由此可計算GUS酶活力。GUS酶活性通常以μg MU/min/mg蛋白質。有時也可以用樣本的鮮重來表示。

基本特性：

1. CAS NO：114162-64-0

2. 英文同義名：5-bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-D-glucuronic acid, cyclohexylammonium salt; X-beta-D- glucuronide CHA salt; X-Gluc CHA Salt; X-glu CHA Salt; X-glcA CHA Salt; BCIG CHA Salt;

3. 分子式：C₁₄H₁₃BrClNO₇ • C₆H₁₃N

4. 分子量：521.79 g/mol

5. 純度：＞99%（HPLC）

6. 外觀：白色至類白色結晶性粉末

7. 溶解性：DMF、甲醇

8. 化學結構式：

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注意事項

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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